外泌体一做就废？千万别在这样一些问题上出错了（230 份好礼包邮送）

时间: 2025-02-02 03:17:09 |   作者: 4℃血液冷藏箱

产品介绍

  新来的师弟外泌体试验发展慢，导师组会宣布「最后通牒」，半个月内拿出数据！科研人真的有苦说不出……

  我真是小看了这个外泌体提取，不是纯度低便是得率低，害我做了这么久的无用功……

  呈现这样的一种状况有几种原因：细胞状况欠好，血清不正确运用或许提取过程需求优化。搞定这些，后续的纯化、判定、qPCR 或蛋白试验还有许多坑呢……

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  ● 传统外泌体提取办法，如聚合物沉降法和超滤法，是形成大颗粒蛋白污染的常见原因。主张运用差速离心/密度梯度离心法，或运用专门的提取试剂盒。

  ● 除蛋白污染外，培育的细胞中死细胞开释的囊泡以及血清成分也会对外泌体纯度形成搅扰，因而应确保细胞活性，并挑选正真适宜的细胞培育基。

  因为外泌体在样本中是微量存在，离心后无法看到沉积是正常现象。或许原因是细胞上清或安排量太低、运用了不通明的超速离心管或离心时运用角转。主张扩展样品量，离心后用 PBS 重悬时不只要洗脱肉眼可见的沉积部位，还要吹洗离心管外侧接近底部的细长区域，而且运用通明离心管和水平转子，使沉积更易调查。

  外泌体试验发起现提现用，主张分装后 -20℃ 或 -80℃ 长时间贮存，一起防止重复冻融。

  外泌体没有公认内参，取决于详细样品，能够再一次进行挑选外源增加 cel-miR-39-3p，或内源 U6、SNORD61、SNORD68、SNORD72 作为内参。其间 cel-miR-39-3p 适用于内参表达不稳定或暂未发现适宜内参的样品。

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  外泌体是一种细胞排泄的小囊泡，可作为信号载体参加安排细胞间相互作用。外泌体体积很小,而且其间含有细胞特异性蛋白、脂质 RNA 等杂乱成分，因而高效提取和纯化成为了一直以来存在的难点之一。

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