人凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA KitHuman coagulation factor F ELISA Kit

  凝血因子是参加血液凝结进程的各种蛋白质组分。它的生理效果是，在血管出血时被激活，和血小板粘连在一起而且补塞血管上的漏口。这样的一个进程被称为凝血。整个凝血进程大致上可分为两个阶段，凝血酶原的激活及凝胶状纤维蛋白的构成。它们部分由肝生成。可认为香豆素所按捺。为一致命名，世界卫生组织按其被发现的先后次第用罗马数字编号，有凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ、Xlll等

  本试剂盒选用竞赛法检测样本中6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中参加样本，再参加生物素符号的辨认抗原，在37℃下孵育30min，两者与固相抗体竞赛结合构成免疫复合物，经PBST洗刷除掉未结合的生物素抗原，然后参加亲和素-HRP，在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合，洗刷后结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的效果下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关

  1)试剂盒中“规范品/样品稀释液”为超纯水（可用双蒸水代替），“停止液”为2M的H2SO4，洗刷液为含0.15%吐温-20的PBST，如不行可自行制造。

  2) 不同公司的缓冲系统存在比较大差异，请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用防止影响试验成果。

  3)浓缩洗刷液在低温下会有少数盐类分出，略微加温后即会消失，不影响运用。

  4)浓缩生物素抗原和浓缩亲和素-HRP稀释前务必先离心一起应防止重复冻融

  2)本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以直接进行恰当份额的稀释（引荐2-5倍稀释），核算时应将成果乘以稀释的倍数。

  3)洗刷液为25倍浓缩液，运用前将一切洗刷液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。

  4)规范品的稀释：取5支洁净的Eppendorf管，每管加150μl的规范品稀释液，别离符号上规范品1，规范品2，规范品3，规范品4，规范品5.取150μl规范品原液参加符号规范品1 的管中，混匀后相同取出150μl，参加下一管，以此类推直至***一管。零孔：直接加规范品/样品稀释液。（见下图）

  5)生物素抗原的稀释：抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中，漩涡混匀15秒至冻干粉彻底溶解，然后将一切液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。

  6)亲和素-HRP的稀释：低速离心（使浓缩液悉数沉到管底），将浓缩亲和素-HRP悉数移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液。

  3)规范品孔：每孔参加稀释好的规范品50μl，零孔参加规范品/样品稀释液50μl，然后参加生物素抗原工作液50μl(零孔有必要要做，并将其作为标曲的***一个点)。

  4)样品孔：参加样品50μl（引荐直接加样，浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍），然后参加生物素抗原工作液50μl。

  7)***次洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

  8) 参加50μl亲和素-HRP到规范品孔和样品孔中，悄悄摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。

  9)第2次洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

  10)显色：每孔先参加显色剂A 50μl，再参加显色剂B 50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色10分钟。

  12)测定：以空白孔调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后10分钟以内进行。

  13)核算：依据浓度和OD值算出规范曲线的回归方程，主张用专用核算软件进行核算，引荐运用ELISAcalc进行核算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。